Phát triển phương pháp ELISA gián tiếp để phát hiện hội chứng tiêu chảy cấp tính ở lợn. Kháng thể IgG coronavirus dựa trên protein đột biến tái tổ hợp

Hội chứng tiêu chảy cấp ở lợn Coronavirus (SADS-CoV) là một loại coronavirus gây bệnh đường ruột ở lợn mới được phát hiện có thể gây tiêu chảy phân nước ở lợn con sơ sinh và gây thiệt hại kinh tế đáng kể cho ngành chăn nuôi lợn.Hiện nay, không có phương pháp huyết thanh học phù hợp để đánh giá hiệu quả của việc nhiễm SADS-CoV và vắc-xin, do đó, nhu cầu cấp thiết là sử dụng xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết enzym hiệu quả (ELISA) để bù đắp cho sự thiếu hụt này.Tại đây, một plasmid tái tổ hợp biểu hiện protein tăng đột biến SADS-CoV (S) được hợp nhất với miền IgG Fc của người được xây dựng để tạo ra baculovirus tái tổ hợp và biểu hiện trong các tế bào HEK 293F.Protein S-Fc được tinh chế bằng nhựa protein G và giữ nguyên khả năng phản ứng với kháng thể chống Fc người và kháng thể chống SADS-CoV.Sau đó, protein S-Fc được sử dụng để phát triển ELISA gián tiếp (S-iELISA) và tối ưu hóa các điều kiện phản ứng của S-iELISA.Kết quả là, bằng cách phân tích giá trị OD450nm của 40 huyết thanh âm tính SADS-CoV được xác nhận bằng xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang (IFA) và Western blotting, giá trị giới hạn được xác định là 0,3711.Hệ số biến thiên (CV) của 6 huyết thanh dương tính SADS-CoV trong và giữa các lần chạy S-iELISA đều nhỏ hơn 10%.Thử nghiệm phản ứng chéo cho thấy S-iELISA không có phản ứng chéo với huyết thanh vi rút lợn khác.Ngoài ra, dựa trên việc phát hiện 111 mẫu huyết thanh lâm sàng, tỷ lệ trùng hợp tổng thể của IFA và S-iELISA là 97,3%.Thử nghiệm trung hòa vi rút với 7 giá trị OD450nm khác nhau của huyết thanh cho thấy giá trị OD450nm được phát hiện bởi S-iELISA có tương quan thuận với xét nghiệm trung hòa vi rút.Cuối cùng, S-iELISA được thực hiện trên 300 mẫu huyết thanh trang trại lợn.Các bộ dụng cụ thương mại của các enterovirus lợn khác cho thấy tỷ lệ IgG dương tính với SADS-CoV, TGEV, PDCoV và PEDV lần lượt là 81,7%, 54% và 65,3%., 6%, tương ứng.Kết quả cho thấy S-iELISA là đặc hiệu, nhạy cảm và có thể tái tạo, và có thể được sử dụng để phát hiện nhiễm SADS-CoV trong ngành chăn nuôi lợn.Bài viết này được bảo vệ bởi bản quyền.Đã đăng ký Bản quyền.